β—甘露聚糖酶的研究及工農業應用
β—甘露聚糖酶(β—mannanase EC 3.2.1.78)是一種半纖維素水解酶,以內切方式降解β—1,4糖苷鍵,降解產物的非還原末端為甘露糖,其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β—甘露聚糖等。β—甘露聚糖酶的來源非常廣泛,包括植物、細菌、真菌、放線菌甚至軟體動物。甘露聚糖是植物性飼料原料中除纖維素、木聚糖之外,分布最廣泛、含量最高的一類半纖維素,而且在許多植物中有淀粉樣的大量積累。畜禽和魚類的消化酶系不含甘露聚糖酶,對這類物質的轉化需要添加外源酶。飼料中添加甘露聚糖酶可消除和降解飼料原料中的抗營養因子,促進畜禽生長,減少養殖污染。
1 β—甘露聚糖酶研究的歷史和菌種選育
早在二十世紀初就有關于分解植物甘露聚糖的報道,但直到70年代,β—甘露聚糖酶的研究才逐漸深入起來。尤其是近多年來對半纖維素資源的開發和甘露寡糖益生價值的發現,以及β—甘露聚糖酶諸多用途的發現,大大推動了β—甘露聚糖酶研究的發展。
1958年,Courtios第一次報道了能產生β—甘露聚糖酶的真菌。1960年,William和Doetsch報道了細菌產生的β—甘露聚糖酶。1965年,Reese和Shibata提出了β—甘露聚糖酶的概念和定義,為以后的研究打下基礎。70年代后,大量β—甘露聚糖酶的產生菌株被篩選、誘變,研究培養基成分特別是碳源對產酶的影響,進行多糖結構的分析。同時,許多不同來源的β—甘露聚糖酶被分離純化,對酶的基本性質的研究取得了較大發展。
國內自80年代開展微生物甘露聚糖酶發酵生產技術研究,進展很快。1980年我國李欣等首次系統研究甘露聚糖的化學組成。1985年以后,隨著β—甘露聚糖酶和甘露寡糖應用領域的開發,新菌種篩選和誘導育種等相關研究競爭顯著加劇。如楊文博等研究了產β-甘露聚糖酶的地衣芽孢桿菌的分離篩選及發酵條件。崔福綿等研究了枯草芽孢桿菌中性β-甘露聚糖酶的產生及性質,選育菌種的酶產量達到120u/ml。
我國另一具有特色的工作是分泌β-甘露聚糖酶的極端微生物菌種的分離選育。如中國科學院微生物研究所馬延和等較早提出利用堿性β—甘露聚糖酶生產甘露寡糖的方法。利用嗜堿芽孢桿菌N16-5以魔芋粉為原料,發酵生產β—甘露聚糖酶,發酵液的酶活力達到500U/ml,甘露寡糖后提取收率80%以上。制備的甘露寡糖主要用于保健食品。該項成果榮獲2000年度國家科技發明二等獎。
進入二十世紀90年代以后,隨著基因工程和蛋白質工程技術的廣泛應用,β—甘露聚糖酶的研究工作越來越集中在基因克隆、重組表達和酶活性工程的研究上,并取得了很大發展。
2 β—甘露聚糖酶的應用
甘露聚糖類物質作為半纖維素的第二大組分,廣泛分布于自然界中。它是所有豆科植物細胞壁的主要組成成分,在其他植物性飼料原料中含量也很高, 如豆粕、小麥、菜籽粕、麩皮中半乳甘露聚糖占非淀粉多糖的含量分別為22.7%、11.9%、19.6%和33.7%,在一些植物膠、椰子、萵苣、合歡、魔芋以及針葉樹中也都含有豐富的甘露聚糖和異甘露聚糖。這使得β—甘露聚糖酶的開發和利用具有重要的意義。
由于畜禽和魚類的消化酶系不含甘露聚糖酶,因此甘露聚糖類物質是一種主要的抗營養因子。微生物來源的β—甘露聚糖酶能以內切方式降解β—1,4糖苷鍵,其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β—甘露聚糖等,降解產物為甘露寡糖和甘露糖。已廣泛證實β—甘露聚糖酶對動物的生長發育具有一系列積極作用。包括:1)促進動物生長,提高動物的飼料轉化效率。β—甘露聚糖酶可提高肉雞增重4.4-10.3%,飼料轉化率2.9-6.0%,提高肉豬增重4.2-8.6%,飼料轉化率4-9%;2) 甘露聚糖酶可以促進營養分消化,改善動物腸道微生物生態,改善動物體的健康狀況。玉米/豆粕日糧中添加0.1%甘露聚糖酶可使肉雞盲腸沙門氏菌數量比對照減少12%;3) 甘露聚糖酶可以降低腸道內容物的粘稠度,減少糞便排泄,減輕環境污染;4) β—甘露聚糖酶可以提高微量元素的生物利用率。甘露聚糖吸附微量元素,抑制其消化吸收; 5) β—甘露聚糖酶降解產物甘露寡糖可促進動物腸道有益菌的生長;6) β—甘露聚糖酶及降解產物甘露寡糖可正向刺激機體免疫活性;7)降解產物甘露寡糖還能夠吸附真菌毒素,減少抗生素等化學藥物的使用,是生產綠色動物食品的添加劑。
我國豬雞的主要日糧是玉米/豆粕型日糧,其主要的抗消化粘性多糖是甘露聚糖。玉米和豆粕中甘露聚糖占非淀粉多糖的比例分別為11.7%和22.7%。大豆多糖可吸收自身重量七倍的水,并吸附多種微量元素,降低其生物利用率。β—甘露聚糖酶是對玉米/豆粕型日糧非常有效的飼用酶制劑,它可以降解其含有的抗消化粘性多糖,促生長提高飼料利用效率的效果非常顯著(表1)。
表1. β-甘露聚糖酶對玉米-豆粕型日糧的應用效果
動物種類
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增重,%
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飼料轉化效率,%
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豬
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+4.2-18
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+4-9
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火雞
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+ 5
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+3.7-6
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肉雞
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+2.2-3.6
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+4.3-5.6
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酶法分解制備甘露寡糖,是β—甘露聚糖酶應用研究的重點內容之一。但一些β—甘露聚糖酶專業性不強,轉化率不太高。目前相當一些甘露寡糖產品是啤酒酵母提取物,如美國奧特奇公司銷售的此種產品,寡糖含量為65%,售價偏高。應用β—甘露聚糖酶酶解魔芋甘露聚糖、田箐膠等制備甘露寡糖,有望較大幅度降低生產成本。同時利用基因工程技術制備高活性β—甘露聚糖酶,提高酶的產量,進一步降低成本,推進甘露聚糖酶和甘露寡糖在飼料中的應用。
3 展望
β—甘露聚糖酶和甘露寡糖的推廣應用,符合生態養殖業的需要。它們還可廣泛應用于食品、紡織、石油等工業領域,如甘露寡糖是最有效的雙岐因子之一,可以口服,國內外已經廣泛地用于保健食品中。β—甘露聚糖酶還可用于從豆類植物中提煉植物油,降低咖啡、巧克力、可可液的粘性。β—甘露聚糖酶和木聚糖酶協同作用可用于造紙工業。β—甘露聚糖酶還可作為石油壓裂液的破膠劑具有效力高、成本低、對地層傷害小等優點。特別是利用該酶來水解魔芋以制備高純度的甘露寡糖,其市場前景十分廣闊。作為生產原料的魔芋廣泛的分布于四川、云南、貴州、湖北西部等欠發達的山區,該酶的大規模生產對于科技扶貧也有著重要的推動作用。因而,近年來β—甘露聚糖酶的研究逐漸成為了國內外的研究熱點。但是國內各有關科研單位的研究大多限于實驗室階段,所報道的發酵酶活低,酶解產物組成不穩定,生產成本較高,難以取得競爭優勢。篩選高比活酶基因,應用基因工程技術構建高效產酶的微生物,進行分子育種改良酶的性質,優化寡糖的酶解制備工藝,是國際上的研究熱點和方向,也具有很好的科學意義和應用前景。